基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶的条件优化研究

摘要：

目的:优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵条件.方法:通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50L发酵罐发酵条件.结果:摇瓶培养时当起始pH值为7.0～7.2,于30℃培养4hr,加入终浓度为0.4mmol/1的IPTG诱导8hr后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量.IPTG诱导浓度和诱导开始时间对酶蛋白表达有显著影响.50L发酵罐正交试验显示IPTG诱导浓度和培养温度对蛋白表达量影响较大,试验结果显示50L发酵罐的最佳条件为:起始pH值为7.0～7.2,于32℃培4hr,加入终浓度为0.4mmol/1的IPTG诱导9hr后收获菌体,发酵结果:每升发酵液可得2g以上的酶蛋白.结论:基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产,为酶法合成核苷酸类似物奠定了基础.

关键词： 基因工程菌 微生物发酵 核苷磷酸化酶 条件优化

作者: 黄炯威 莫世艺 刘宁 梁剑锋 刘桂祯

作者单位: 开平牵牛生化制药有限公司 广东 江门 529339

会议类型: 国内会议

会议名称: 2013年核苷酸/核酸分离提取及衍生物开发利用新技术、新设备交流研讨会

会议地点: 杭州

会议语种:中文

页码: 192-201

在线出版日期: 2013-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）