肝癌新标志物高尔基体蛋白73定量检测试剂的研制和大样本研究
目的：建立肝癌标志物高尔基体蛋白73(GP73)的临床检测方法,探讨其单独及与血清中甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP—L3)对原发性肝癌(PHC)诊断的意义,为PHC的临床诊疗提供更多依据.方法：根据报道的GP73全基因序列设计、合成巢式PCR引物,从HepG2细胞中分离扩增出GP73的基因片段.将该片段克隆到pET-28载体中,经序列分析后,将该重组载体转染至大肠杆菌BL21中,并诱导表达、纯化后,免疫新西兰白兔制备多抗,同时按常规方法免疫Bablc小鼠,建立杂交瘤细胞系,筛选和制备单抗.采用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记纯化的多抗.将纯化后的单抗按常规方法包被酶联板,按常规ELISA方法,分别加入肝癌患者血清温浴后,再加入酶标多抗温浴后,加入底物显色,建立血清了双抗体夹心ELISA检测GP73的方法.随机选取105例治疗前HCC患者、570例疑似肝癌病例、100例慢性肝炎患者、490例献血员标本,分别进行GP73、AFP和AFP-L3的检测,并计算AFP-L3占AFP总量的百分含量.同时,针对首次未诊断肝癌的75肝硬化患者进行了1年的随访检测研究.结果及结论：成功获得GP73基因片段、表达了重组蛋白、免疫动物并获得了多抗及单抗、建立了ELISA检测方法;统计分析表明GP73对HCC诊断具有较好的灵敏度，AFP-L3具有较高的特异性。血清GP73, AFP和AFP异质体联合检测，可有效提高HCC的临床诊断;随访研究表明GP73检测对肝癌的早期诊断有重要意义。
原发性肝癌 临床诊断 高尔基体蛋白73 定量检测
李伯安 徐军 刘爱霞 刘佳 郭静霞 毛远丽
解放军第302医院临检中心 100039
国内会议
北京
中文
212-213
2012-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）