活性氧(ROS)介导的肺细胞线粒体凋亡在染矽尘大鼠肺纤维化中的作用研究
目的：通过抑制大鼠肺细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性,探讨ROS在肺细胞线粒体凋亡介导肺纤维化中的作用及矽肺的发病机制。方法：24只成年雄性Spague-Dawley(SD)大鼠,体重180-220g,随机分为生理盐水对照组、矽肺模型组和N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)干预组,每组8只。矽肺模型组和NAC干预组采用非气管暴露法一次性肺内注入50g/L二氧化硅悬浊液1ml,对照组注入等体积生理盐水,NAC干预组自造模当天起每天以灌胃方式给予600mg/kg NAC1ml,各组动物自由进食和饮水。造模28天后统一处死所有实验动物,收集一侧肺灌洗回收液,分离纯化肺细胞,流式细胞仪检测肺细胞内ROS含量和线粒体膜电位(mitochondrial transmembrane potential,MTP)的变化水平;另取灌洗侧肺组织,Trizol固定,检测Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达水平;将灌洗侧部分肺组织裂解,免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织内细胞色素C(cytochrome C,CytC),天冬半胱氨酸特异性蛋白-9(cysteinyl aspartate specific protease-9,caspase-9)和天冬半胱氨酸特异性蛋白酶-3(cysteinylaspartate specific protease-3,caspase-3)的表达水平;另一侧肺用多聚甲醛固定,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,制作病理标本,观察肺组织病理变化及肺纤维化程度。结果：NAC干预组大鼠ROS含量、线粒体去极化率均较矽肺模型组低,但高于生理盐水对照组(P＜0.05);矽肺模型组大鼠肺组织内CytC,caspase-9,caspase-3及Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的表达水平最高,NAC干预组各指标均高于生理盐水对照组(P＜0.05);NAC干预组大鼠肺组织纤维化病变较矽肺模型组减轻,但仍高于生理盐水对照组。结论：被NAC干预的染矽尘大鼠肺细胞内ROS活性被抑制后,线粒体凋亡信号转导被阻断,肺组织纤维化程度减轻。因此,ROS可能在肺细胞线粒体凋亡致肺纤维化中发挥重要的作用。
矽肺 发病机制 肺细胞线粒体 凋亡机理 活性氧介导
张林 刘楠 陈刚 袁扬 姚三巧 何艳玲 李清钊 袁腾 黄娜 郭菲菲 袁取祥 白玉萍 金玉兰
河北联合大学公共卫生学院,河北 唐山,063000 中国煤矿工人北戴河疗养院,河北 北戴河,066104 河北联合大学公共卫生学院,河北 唐山,063000;中国煤矿工人北戴河疗养院,河北 北戴河,066104 河北联合大学公共卫生学院,河北 唐山,063000;北京市昌平区城区社区卫生服务中心
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2013-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）