BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要：

根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入酵母(P.Pastoris)分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2.用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化P.Pastoris GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用1.5％甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为23.2 Kda;Western blot分析表明该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性,为BVDV-2诊断试剂研发奠定基础。

关键词： 牛病毒性腹泻病毒 基因序列 克隆表达 毕赤酵母 载体构建

作者: 刘昱成 王国超 孟庆玲 乔军 才学鹏 贺志昊 杨海波 陈创夫

作者单位: 石河子大学动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室,新疆石河子,832003 石河子大学动物遗传改良与疾病控制新疆自治区重点实验室,新疆石河子,832003;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州,730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州,730046

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会

会议地点: 徐州

会议语种:中文

页码: 1046-1049

在线出版日期: 2013-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）