衰老成纤维细胞中Tiam1对OPN的调控对邻近上皮细胞的促迁移和促侵袭作用
目的:进一步研究Tiaml,OPN的表达水平和肿瘤微环境细胞衰老的关系，及其对肿瘤生物学行为的影响。方法：以野生型人乳腺成纤维细胞RMF为对象，应用shRNA技术构建Tiaml蛋白低表达的细胞株RMF-shTiam,OPN低表达的细胞株RMF-shOPN，以及Tiaml和OPN双敲除的细胞株RMF-shTiam-shOPN;应用重组DNA技术构建Tiaml蛋白高表达的细胞株RMF+Tiam;应用三维细胞共培养后分离再培养技术及Transwell细胞侵袭实验检测共培养后上皮细胞迁移力的变化;应用改良Transwell细胞侵袭实验检测分泌型OPN对上皮细胞的直接促迁移作用.结果:成功构建Tiaml低表达细胞株RMF-shTiam,OPN低表达细胞株RMF-shOPN,以及Tiaml高表达细胞株RMF+Tiam，并经过实时荧光RT-PCR及/或蛋白印迹法验证;在Tiaml低表达的RMF-shTiam中，其OPN的mRNA及蛋白表达与对照空载细胞比较均显著上调1.69±0.07倍和2.70±0.60倍;与衰老成纤维细胞共培养的上皮细胞HMEC在matrigel基质中的侵袭力较未衰老组显著增加，上调衰老成纤维细胞中的Tiaml表达水平或抑制衰老成纤维细胞中的OPN表达水平均可使该组HMEC细胞的侵袭力较对照组显著降低;将与衰老成纤维细胞共培养的上皮细胞HMEC分离再培养，从衰老组分离的HMEC细胞迁移力较未衰老组显著增加.结论:(1)在成纤维细胞中，OPN可能作为Tiaml的下游调控基因，与Tiaml蛋白的表达呈负相关;(2)亚致死性化学药物或X射线照射可成功诱导成纤维细胞衰老，三种诱导剂的诱导效率无显著性差异;(3)在成纤维细胞中诱导衰老可导致Tiaml蛋白水解，该作用可能由Ca离子依赖的Calpain水解酶所介导，并导致其下游的OPN在mRNA及蛋白水平的上调;(3)衰老成纤维细胞可促进邻近相关上皮细胞侵袭力和迁移力的增加，该作用至少部分是由于Tiaml的降解以及后续的OPN蛋白的上调造成的。
肺癌 成纤维细胞 基因调控 侵袭迁移
刘洁薇 周清华 侯梅 李潞 许峰 尤嘉琮 李洋 刘彬 祖玲玲 Rachel J. Buchsbaum
四川省肺癌分子重点实验室 四川省肺癌分子重点实验室;天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室 天津市肺癌研究所 天津医科大学总医院 天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室 天津市肺癌研究所 天津医科大学总医院 美国 Tufts University
国内会议
长春
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325-327
2013-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）