人肠激酶轻链突变体的基因克隆及在大肠杆菌中的表达
(0) 目的 原核表达人肠激酶轻链突变体(hEKLm),以期提高肠激酶的稳定性及特异性,并应用于融合蛋白的切割与纯化。方法 根据文献调研对人肠激酶轻链氨基酸序列进行改造并采用overlap PCR 合成其对应DNA 片段,将DsbC 和6×His 作为融合标签,在大肠杆菌中进行诱导表达。结果 成功构建了原核表达质粒 pET28b-DsbC-hEKLm,并将该质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)。经SDSPAGE分析,重组蛋白以包涵体形式表达,重组蛋白经复性后显示具有催化活性。结论 成功使用大肠杆菌表达了hEKLm,为其进一步在融合蛋白的切割和纯化方面的应用奠定了基础。
人肠激酶轻链 包涵体 原核表达
徐瑞敏 张贵星 吕文蕾 王西新 郑一超 刘宏民
郑州大学药学院,郑州大学新药研究开发中心,河南郑州 450001
国内会议
南京
中文
1-9
2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）