会议专题

AQP3通过调节自噬在UVA诱导NHSFs衰老的过程中发挥保护性作用

  目的 研究AQP3 在UVA 诱导的正常人皮肤成纤维细胞衰老过程中发挥的作用及其相关作用机制.方法 ①使用组织块分离法原代培养正常人皮肤成纤维细胞;②UVA 辐射原代人皮肤成纤维细胞,行β-半乳糖苷酶染色,Western-blot 及RT-PCR 检测衰老相关分子P16 及检测AQP3 水平的变化;③构建AQP3shRNA,稳定转染人皮肤成纤维细胞,鉴定;④免疫荧光染色检测细胞内自噬斑点的变化,Western-blot 检测微管相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ水平;⑤β-半乳糖苷酶染色率,AQP3 及LC3 荧光染色率均采用spss16.0 统计学分析软件进行统计学分析(P<0.05 为差异明显,有统计学意义).结果 ①UVA 辐射原代人皮肤成纤维细胞,24h 后30J 和50J 组β-半乳糖苷酶染色率及P16 表达量逐渐增加,而5J、10J、15J 组与未照光组相比,β-半乳糖苷酶染色率及P16 表达量差异不明显;②5J,10J,15JUVA辐射原代人皮肤成纤维细胞后AQP3 水平逐渐增高,30J 和50J UVA 处理组AQP3 表达低于照光前;③慢病毒转染AQP3shRNA,成功构建并鉴定NHSFs-AQP3shRNA 细胞;AQP3shRNA转染后NHSFs 生长受抑,检测细胞中P16 的表达及β-半乳糖苷酶染色率增加;5JUVA 辐射NHSFs-AQP3shRNA 后,与未转染组相比,β-半乳糖苷酶染色率及P16 表达量也明显增加;④免疫荧光染色可见:5JUVA 辐射NHSFs 后细胞内自噬斑点增多,而50JUVA 处理后自噬斑点明显减少,western-blot 的结果提示LC3Ⅱ/Ⅰ水平的表达趋势与该结果一致;⑤免疫荧光染色可见:AQP3shRNA 转染后的NHSFs 细胞内LC3Ⅱ/Ⅰ水平下降,5JUVA 辐射NHSFs-AQP3shRNA 后,细胞内自噬斑点较5JUVA 辐射NHSFs 组明显减少;western-blot 的结果示LC3Ⅱ/Ⅰ水平变化与该结果一致.结论 低能量UVA 辐射人皮肤成纤维细胞不足以引起衰老,较高能量UVA 能够诱导细胞老化.低剂量UVA 导致AQP3 的表达上升,干扰细胞表达AQP3 后细胞出现衰老,同等剂量的UVA 辐射加重细胞衰老.自噬的改变与AQP3的表达一致,干扰AQP3 的表达使得NHSFs 细胞内自噬水平下降,低剂量UVA 条件下亦发生细胞自噬降低.因此,我们认为:AQP3 在UVA 诱导人皮肤成纤维细胞衰老的过程中起保护性作用,并且是通过自噬进行调节的.

AQP3 UVA 人皮肤成纤维细胞 自噬

刘芳芬 谢红付 雷丹 李吉

中南大学湘雅医院

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2012-07-19(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)