蓝舌病病毒4型VP5蛋白单克隆抗体的制备
目的：对中国BTV4型VP5蛋白制备型特异性单克隆抗体(MAbs)，为BTV4的型特异性检测方法的建立以及VP5蛋白功能研究奠定基础。方法:提取BTV4的RNA，设计特异性引物对目的基因SS进行反转录-PCR;利用pMAL-c4、原核表达系统和Bac-to-Bac真核表达系统对VPS蛋白进行表达，纯化以及生物学特性鉴定;利用传统杂交瘤细胞融合技术制备BTV4 VP5蛋白的MAbs并且对其进行特性鉴定。结果:成功获得具有良好生物学活性的BTV4 VP5蛋白;制备出6株针对BTV4 VP5蛋白的MAbs, Western-blot结果显示每株MAb均可以与重组VPS蛋白和天然VP5蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光(IFA)结果表明6株MAbs均可以与BTV4感染的BHK-21细胞呈现特异性反应;IFA系统鉴定表明:MAb 1B6只能与BTV4呈现特异性的反应;其余5株MAb、与其它23个血清型BTV反应谱系不同，而6株MAbs均不与茨城病病毒(IBAV)和中山病病毒(CV)发生反应。结论:在本研究中，最初试图表达全长BTV4 VP5蛋白，但无论是真核表达还是原核表达，VP5蛋白表达量都很低。经查文献查阅发现，VP5蛋白N端前41个氨基酸形成两个亲水亲脂的双螺旋结构，对细胞膜具有穿透作用，因此对细胞具有毒性进而影响VP5蛋白的有效表达。为解决这一问题，把VP5蛋白N端41个氨基酸缺失表达，结果其真核表达和原核表达表达量都很大，并且保持良好的生物学活性，能够被BTV4羊阳性血清所识别。
动物医学 蓝舌病 蛋白表达 单克隆抗体
孙亮 孙恩成 徐青元 杨涛 吴东来
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001
国内会议
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
南京
中文
12-12
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）