蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立
目的:建立蓝舌病病毒(BTV)反向遗传操作技术平台.方法:本研究在对中国分离的一株血清1型BTV进行全基因测序的基础上,构建同时含有T7启动子序列和BTV各基因片段的10个质粒,其中在NS3基因片段通过核苷酸点突变方法加入分子标记,利用T7聚合酶体外转录试剂盒对酶切线性化的10个质粒进行体外转录,获得完整的10个目的基因的ssRNA.在BSR细胞中先转染已经构建的表达BTV的VP1、VP3、VP4、VP6、VP7、NS1、NS2蛋白的7个真核表达质粒,18小时后转染10个体外转录获得的ssRNA,48 小时后收集转染细胞上清在BSR细胞中进行病毒增殖.对增殖的病毒进行间接免疫荧光、电镜以及基因测序检测.结果:间接免疫荧光检测、电镜检测以及基因测序结果表明,成功拯救出了带有分子标记的BTV.结论:本研究首次在中国成功建立了BTV反向遗传操作系统,为深入开展BTV致病机理、传播机制、基因组功能的研究以及新型疫苗的研发奠定了基础.
动物医学 蓝舌病病毒 反向遗传操作系统 技术分析
杨涛 徐青元 孙恩成 李俊平 冯瑜菲 孙亮 孙晶 吴东来
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001
国内会议
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
南京
中文
21-21
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）