鸡TOLL样受体3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备
目的:研究鸡TOLL样受体3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备。方法:采用Trizol法提取DF-1细胞总RNA,反转录成cDNA,根据GenBank上公布的chTLR3基因序列设计特异性引物,克隆chTLR3胞外区部分基因片段,预计大小为1317 bp,并将其克隆于表达载体pET30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞并进行IPTG诱导表达;用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗chTLR3多克隆抗体后采用间接ELISA、Western-blot及体外瞬时转染法检测该兔抗chTLR3多克隆抗体的反应性和特异性。结果:经PCR扩增、1％琼脂糖凝胶电泳鉴定结果显示,在1317 bp位置出现与预计片段大小相符的特异性单一条带。成功构建重组原核质粒pET30a-chTLR3并通过体外诱导表达,表达出大小约为58.8KD的重组蛋白。利用纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得兔抗chTLR3多克隆抗体,经间接ELISA检测此多克隆抗体效价为1:216,经Western-blot及体外瞬时转染、间接免疫荧光法鉴定兔抗chTLR3多克隆抗体具有良好的特异性。表明成功制备效价高、特异性强的抗chTLR3多克隆抗体。结论:对Toll样受体功能的研究,有必要得到其相应的抗体。根据实验室的具体情况,自行制备了兔抗chTLR3多克隆抗体,作为研究chTLR3功能的辅助工具。本试验成功制备出效价高、特异性强的抗chTLR3多克隆抗体,为进一步探讨chTLR3参与病毒致鸡发病分子机制奠定了基础。
鸡免疫学 TOLL样受体 基因克隆 抗体制备
张瑞莉 王杲强 孟巍 于群 潘龙 杨桂君
东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030
国内会议
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
南京
中文
24-24
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）