J亚群禽白血病病毒环介导等温扩增检测方法的建立
本研究旨在建立一种快速、特异、灵敏、简捷的J亚群禽白血病及其病毒LAMP检测方法,并为后续开发具有实用价值的ALV-J LAMP快速检测试剂盒奠定基础.本研究通过对目前国内流行毒株及GeneBank中已发表的ALV-J的基因组序列比较，应用LAMP引物在线设计软件，针对ALV-J的gag、pol和env基因设计、筛选出有效LAMP引物，并对LAMP反应温度、Mg2+浓度、内外引物浓度等参数以及反应灵敏度、特异性进行优化和比较研究。结果表明:所设计的四套引物中，选取pol和env基因连接区域设计的LAMP引物扩增效果最好，扩增反应结束后，加人SYBR GreenⅠ，结果鉴定更简便、快捷，不需要特殊的仪器。在选定引物的基础上，对影响LAMP扩增的反应条件进行了实验优化，最终确定扩增条件的几个主要参数为:温度63℃、镁离子浓度6mM、外引物浓度0.2μM、内引物浓度2.0μM、甜菜碱浓度1M。灵敏度实验结果表明，本研究所建立LAMP检测方法与荧光定量PCR相当，均明显高于普通PCR检测方法。特异性实验结果表明，本研究所建立LAMP检测方法与A亚群禽白血病病毒、B亚群禽白血病病毒、马立克氏病病毒、鸡传染性贫血病病毒、鸡传染性法氏囊等其它相关病毒没有交叉反应。通过本项研究，建立了一套J亚群禽白血病及病毒的高灵敏度、高特异性、可靠、简便快速、成本低廉、适于实验室及兽医基层临诊应用的LAMP检测方法。
J亚群禽白血病病毒 基因组序列 检测方法
刘超男 高雪丽 吕晓萍 郑世民
东北农业大学,哈尔滨150030
国内会议
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
南京
中文
39-39
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）