会议专题

鸡T细胞表面抑制性受体PD-1及其配体PD-L1基因的克隆及原核表达

本研究根据GenBank上鸡PD-1和PD-L1预测序列,设计二者特异性克隆引物,以鸡外周血淋巴细胞提取的总RNA反转录的cDNA为模板,利用PCR技术获得PD-1及其配体PD-Ll全长基因片段。将鸡PD-1和PD-L1片段克隆于pMD18-T-simple载体,构建重组克隆载体pMD-PD-1和pMD-PD-L1,鉴定并测序后构建PD-1和PD-L1原核重组表达载体pET-28a-PD-1和pET-32a-PD-Ll。将其转化至Rosetta(DE3)表达菌株中,通过对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,并通过SDS-PAGE对蛋白产物进行分析以确定该蛋白最适表达条件。测序结果表明,成功扩增出468饰的鸡PD-1全长基因和669饰的鸡PD-L1全长基因。SDS-PAGE分析结果显示,本研究所构建的pET-28a-PD-1原核表达菌体在37℃,IPTG 0.1 mmol/L诱导4h可获高效表达的分子量为20ku的PD-1目的蛋白,而pET-32a-PD-L1原核表达菌体则在30℃, IPTG 0.4 mmol/L诱导4h可获高效表达的分子量为44ku的PD-L1目的蛋白,二者均以包涵体形式存在。本研究利用分子生物学技术,成功的获得了鸡的PD-1和PD-Ll全长基因片段及其蛋白产物,为其单克隆抗体制备、阻断PD-1:PD-L1通路以及对鸡免疫抑制性疾病诱导T细胞免疫抑制反应的恢复奠定基础。

鸡免疫学 淋巴T细胞 程序性死亡分子1 基因克隆 原核表达

王选年 李博文 孙国鹏 王爱国 张艳芳 朱艳平 银梅

新乡学院 新乡453003

国内会议

2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

南京

中文

43-43

2013-08-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)