新城疫HN蛋白的表达、纯化及其在新城疫抗体检测中的应用
本研究通过生物信息学方法分析NDVxx08 株基因组特征,选取HN蛋白主要抗原区设计引物,利用PCR技术扩增出HN 片段主要抗原区(Ile175-Lys367),将该基因片段克隆于pMD18-T-simple载体,构建重组克隆载体pMD-HIle NLys,鉴定并测序后构建HIle NLys 原核重组表达载体pET32-HIleNLys,将其转化至Rosetta(DE3)表达菌株中,对IPTG 浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,以确定该蛋白最适表达条件,并通过SDS-PAGE和Western-blot对蛋白产物进行分析和抗原性进行鉴定.以最适诱导条件对HIle NLys表达菌体进行诱导并收集上清，并通过Ni-NTA亲和树脂对目的蛋白进行纯化。利用纯化获得的HIleNLys重组蛋白作为包被抗原，通过优化最适抗原包被浓度、待检血清最适稀释比例，建立NDV血清抗体效价的间接ELISA检测方法。利用本研究所建立的检测方法对40份NDV临床阳性血清、10份NDV临床阴性血清、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒和鸡禽流感病毒的标准阳性血清进行检测，并与血凝抑制实验(HI)结果进行比较，确定所建立检测方法的敏感性和特异性。本研究建立的检测新城疫抗体的间接ELISA方法具有简单、快速，特异性强等优点能够用于鸡新城疫抗体水平的快速检测。
鸡病毒学 蛋白表达 亲和纯化 抗体检测
王选年 阮涛 孙国鹏 张艳芳 朱艳平 李鹏 银梅
新乡学院 新乡 453003
国内会议
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
南京
中文
44-44
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）