表达PRRSV GP5蛋白重组减毒猪霍乱沙门氏菌C78-1构建及生物学特性
为了构建表达猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒PRRSV GP5蛋白口服重组减毒猪霍乱沙门氏菌活载体疫苗株,通过PCR 克隆去除信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3493 中,构建了重组质粒pYA3493-dORF5.将该重组质粒电转入猪霍乱沙门氏菌基因缺失株(缺失crp,asd基因),获得PRRSV ORF5 基因减毒猪霍乱沙门氏菌ΔcrpΔasdC78-1(pYA-dORF5)重组菌.通过对重组菌表型性状、生长特性、稳定性及安全性和定制能力进行测定,并对重组菌表达的GP5 蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,该菌株保留了在DAP 阴性环境中生存的能力;不能利用麦芽糖、蔗糖及果糖等碳源,但保留了利用葡萄糖的能力,其生长速度低于强毒株C78-1,而与ΔcrpΔasdC78-1相比变化不明显;在体外连续传代能够稳定遗传dORF5目的基因片段.Western-blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;通过口服途径与强毒株C78-1及猪霍乱沙门氏菌弱毒疫苗株C500相比,ΔcrpΔasdC78-1(pYA-dORF5) 毒力分别下降492倍和1.3倍.通过侵袭力实验测得重组菌在血液,肠系膜淋巴结和脾脏均定植能力良好.结果表明,成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服重组减毒猪霍乱沙门氏菌,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定了良好的基础.
猪繁殖与呼吸障碍综合征 疫苗载体 猪霍乱沙门氏菌 生物学特性
张淼丹 张明亮 张春杰 程相朝 李银聚 张俊峰 何雷 龙塔
河南科技大学动物科技学院,洛阳471003
国内会议
2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会
南京
中文
240-245
2013-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）