变形链球菌UA159Pfs蛋白原核表达纯化及对自诱导分子2合成的影响
目的：合成有活性的变形链球菌自诱导分子2(A1-2),探讨A1-2在牙面生物膜形成中的作用,以期为后续研究奠定基础.方法：构建表达载体pET21a(+)-pfs;诱导表达S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)蛋白,蛋白质印迹法鉴定;镍柱纯化;Pfs与S-核糖基高半胱氨酸酶(LuxS)催化S-腺苷L高半胱氨酸合成AI-2,以哈氏弧菌BB170检测其生物活性,并观察Pfs蛋白浓度对A1-2合成的影响.结果：成功构建了表达载体pET21a(+)-pfs;1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达4h蛋白表达量最高,纯化得蛋白质量浓度为0.8 g/L;蛋白质印迹法证实表达产物为Pfs融合蛋白.合成了有生物活性的AI-2,其诱导哈氏弧菌BB170发光的强度在5h时最强.Pfs质量浓度与AI-2相对活性呈浓度依赖关系(P＜0.05),且随着Pfs蛋白质量浓度的升高(0～0.38g/L)AI-2的相对活性逐渐增大(0～29.14±1.35),二者呈正相关(r=0.819,P=0.000).结论：Pfs融合蛋白具备相应的生物功能,可在体外合成有活性的AI-2;线性相关分析表明Pfs蛋白浓度与合成的AI-2相对活性呈正相关.
龋病 变形链球菌 蛋白纯化 原核表达 自诱导分子2
黄英 肖刚 李芝香 赵东方 郭青玉
710004 西安交通大学医学院附属口腔医院儿童口腔科
国内会议
西安
中文
68-73
2012-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）