刚地弓形虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及抗原性分析
目的：克隆、表达刚地弓形虫蛋白质二硫键异构酶(TgPDI)基因,并分析其抗原性。方法：制备弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgPDI基因全长编码序列(GenBank登录号:AJ306291.2)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接人pET-30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5a,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将重组质粒pET-30a(+)-TgPDI转化至E coli Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。分别以抗His标签抗体和兔抗弓形虫血清为一抗,免疫印迹(Western blotting)分析鉴定重组蛋白及其抗原性。结果：RT-PCR扩增产物约为1426bp.菌落PCR、双酶切及测序结果显示重组质粒pET-30a(+)-TgPDI构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约58kDa的可溶性重组蛋白。Western blotting结果表明,诱导表达的蛋白质为带His标签的重组融合蛋白,且能被兔抗弓形虫血清识别。结论：获得刚地弓形虫重组PDI蛋白质,且具有抗原性。
刚地弓形虫 蛋白质二硫键异构酶 原核表达 抗原性特征
王海龙 李润花 殷丽天 孟晓丽 刘红丽 张铁娥 关丽 殷国荣
山西医科大学医学寄生虫学研究所,太原030001 山西医科大学医学寄生虫学研究所,太原030001;太原师范学院生物系,太原030031 山西医科大学生理学系,太原,030001
国内会议
北京
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127-131
2013-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）