猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)中的表达、纯化和兔抗血清的制备

摘要：

目的：构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TS045W-4B-TSOL18，表达纯化TS045W-4B-TSOL18重组融合蛋白，制备兔抗重组蛋白血清。方法：用疏水甘氨酸接头连接TS045W-4B和TSOL18编码基因，通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B-TSOL18融合基因，定向克隆到pGEX-lλT。T表达载体，构建重组质粒pGEX-TS045W-4B-TSOL18；转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3),IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳分析表达情况；亲和层析纯化获得重组融合蛋白，免疫兔制备抗血清；ELISA测定抗血清的效价，Western blot鉴定抗血清的特异性。结果：全基因扩增出789by的TS045W-4B-TSOL18融合基因，酶切和测序鉴定证实TS045W-4B-TSOL18融合基因成功插人pGEX-1λT中；SDS-PAGE分析显示重组融合蛋白相对分子质量约为55kDa，经亲和层析后可获得纯度为85％的重组蛋白；ELISA测定抗血清的效价为1:512000, Western blot证实该抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。结论：猪带绦虫TS045W-4B-TSOL18融合基因能在大肠埃希菌中高效表达，成功制备了高纯度的TS045W-4B-TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清，为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础。

关键词： 猪带绦虫 基因重组 融合表达 大肠埃希菌 抗重组蛋白血清

作者: 周必英 周泠 刘美辰 刘晖 贺莉芳 张曦

会议类型: 国内会议

会议名称: 第五届北京热带医学与寄生虫学论坛

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 143-144

在线出版日期: 2013-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）