甲基-β-环糊精、大麻素受体拮抗剂和N-乙酰半胱氨酸对anandamide诱导的原代肝星状细胞死亡和P38/JNK信号通路的影响
目的:探讨脂筏(LRs)、大麻素受体(CBR)及活性氧簇(ROS)在内源性大麻素anandmide(AEA)诱导的原代肝星状细胞(HSC)死亡和P38/JNK信号通路的影响。方法:(1)腹部皮肤贴敷尾蚴的方法制备血吸虫肝纤维化小鼠模型,Masson染色证实模型成功;(2)采用非连续密度梯度离心法提取血吸虫肝纤维化小鼠的原代HSC,用α-平滑肌蛋白(α-SMA)和结蛋白(desmin)双重免疫荧光染色法证实;(3)Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术检测甲基-β-环糊精(MCD)、大麻素受体拮抗剂(SR141716和AM630)及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对AEA诱导的原代HSC死亡的影响;(4)采用Western-blotting方法检测磷酸化-P38 (P-ERK)和-JNK(P-JNK)表达的影响。结果;(1)成功建立血吸虫肝纤维化小鼠模型:与正常小鼠的肝脏组织相比,masson染色显示感染尾蚴6周后的小鼠肝脏组织中嗜酸性肉芽肿形成,虫卵和胶原纤维分别在血管和肝小叶内沉积。(2)成功提取原代HSC:α-SMA和desmin双重免疫荧光染色显示提取的原代HSC的纯度为95％。(3)MCD和NAC均可抑制AEA诱导的原代HSC的死亡(P<0.05),而大麻素拮抗剂均不能。(4)MCD、CBR1拮抗剂SR141716和抗氧化剂NAC均可抑制AEA诱导的P-P38和P-JNK的表达上述效应(P<0.05),而CBR2拮抗剂AM630则仅能抑制P-P38的表达(P<0.05),而对AEA诱导的P-JNK的表达无明显影响。结论:AEA可通过激活P38/JNK MAPK信号通路促进HSC的死亡,且依赖于胞膜脂筏的完整性。氧化应激通过P38/JNK MAPK信号通路参与了AEA诱导的原代HSC的死亡。脂筏与CBR1的活化可激活P38/JNK MAPK信号通路,而CBR2的活化仅可激活P38信号通路。
肝纤维化 实验药理学 肝星状细胞 信号通路
刘萍 王密 陆小丹 张淑娟 唐望先
华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉市解放大道1095号同济医院肝病研究所,430030
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142-146
2013-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）