人树突状细胞信号传导通路抑制因子1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
目的:构建人树突状细胞(hDCs)信号传导通路抑制因子1(soCs1)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法:根据人树突状细胞SOCS1基因(NM-0037),根据文献筛选出一个靶序列,设计并合成包含正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamH和Xho酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(含U6启动子和EGFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS1-EGFP慢病毒重组质粒,此慢病毒重组质粒与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度.结果:将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR及western-blott检测显示慢病毒重组质粒感染hDCs后，与空白对照组及阴性对照组比较，明显抑制了SOCS1的表达。结论:构建的pRNA-Lenti-SOCSI-EGFP慢病毒载体可有效地抑制hDCs的SOCSI的表达。hDC-SOCS1基因RNAi慢病毒载体的构建成功，为进一步研究DC增强抗肿瘤免疫应答效应奠定基础。
细胞治疗 临床试验 人树突状细胞 RNA干扰 慢病毒载体 抗肿瘤效应
涂微 阮健 罗荣城
510515 南方医科大学南方医院肿瘤中心
国内会议
北京
中文
295-296
2012-09-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）