GIT1丝氨酸419通过和CamkⅡβ相互结合促进BDNF诱导的皮层神经元的突触形成
目的:探讨脑源性神经生长因子(brain derived neutrophic factor,BDNF)调节皮层神经元突触形成的机制.方法:通过改良的M.Meng方法分离培养Sprague Dawley大鼠皮层神经元,运用CamkⅡ的特异性抑制剂KN-93和GLT1的小RNA干扰序列作用于皮层神经元,检测BDNF刺激条件下的突触形成.构建质粒HA-GIT1和Flag-CamkⅡβ,以HA-GIT1为模板分别构建GIT1删除SLD结构域的HA-G(I)T1 (△SLD)和将第419丝氨酸(S)突变为丙氨酸(A)的突变质粒HA-GIT1(S419A).分别在HEK293T细胞和皮层神经元,检测BDNF刺激条件下GIT与CamkⅡβ的相互作用以及对突触形成的影响.结果:BDNF刺激皮层神经元显著增加了突触形成,同时明显增强了CamkⅡβ的磷酸化以及GIT1和p-CamkⅡthr286的相互结合.GIT1的小RNA干扰序列和CamkⅡ的特异性抑制剂KN-93显著抑制CamkⅡβ的磷酸化和皮层神经元的突触形成.GIT1与CamkⅡβ的结合需要GIT1的SLD结构域以及位于此结构域的丝氨酸419.GIT1(S419A)转染皮层神经元明显抑制BDNF诱导的CamkⅡβ的磷酸化和突触形成.结论:通过与CamkⅡβ的相互结合,GIT1的S419参与了BDNF所诱导的皮层神经元的突触形成.
脑源性神经生长因子 神经元突触 分离培养 诱导分化
任永信 张宁 殷国勇
南京医科大学第一附属医院脊柱外科 210029 南京市
国内会议
银川
中文
397-397
2012-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）