结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关蛋白的原核表达及纯化

摘要：

　　目的：构建结核分枝杆菌pncA基因的原核表达质粒,获得结核分枝杆菌吡嗪酰胺酶的表达蛋白。方法：制备结核分枝杆菌基因组DNA,采用聚合酶链反应扩增目的基因片段；通过pET28a构建表达载体pET28a-pncA,序列测定证实正确后转化大肠埃希菌DH10b,经IPTG诱导表达His-吡嗪酰胺酶融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白。结果：扩增出结核分枝杆菌pncA基因并构建了具有正确基因序列的质粒载体pET28a-pncA,转化大肠埃希菌BL21后经诱导产生了分子质量单位约20 ku的表达产物,并得到纯化的带His标签的目的蛋白。结论：构建了结核分枝杆菌pncA基因原核表达质粒,并诱导表达了His-吡嗪酰胺酶融合蛋白,为进一步研究吡嗪酰胺耐药性奠定了基础。

关键词： 结核分枝杆菌 pncA基因 吡嗪酰胺酶 耐药基因 原核表达

作者: LI Hui 李辉 SHI Jie 石洁 MA Xiao-guang 马晓光 ZHAO Yu-ling 赵玉玲 YAN Guo-rui 闫国蕊 XING Jin 邢进 ZHANG Ying 张颖

作者单位: Henan Province Center for Disease Control and Prevention,Zheng zhou 450016 China 河南省疾病预防控制中心,河南郑州450016 Johns Hopkins University,Baltimore,MD 21205,USA 约翰霍普金斯大学,巴尔的摩美国,21205

会议类型: 国内会议

会议名称: 2012科学研究与结核病防治高峰论坛

会议地点: 武夷山

会议语种:中文

页码: 177-180

在线出版日期: 2012-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）