碱性木聚糖酶在毕赤酵母中高效表达体系的构建及其机理研究
本研究基于毕赤酵母基因组、转录组以及蛋白质等组学技术研究的基础，采用密码子优化技术，增加基因剂量以及分泌途径改造技术实现规模化，在毕赤酵母中高效表达应用于纸浆漂白的耐热耐碱性木聚糖酶，同时，通过iTR.AQ(isobaric tags for relativeand absolute quantification)方法从蛋白质组学研究了与分泌途径相关的关键蛋白。主要研究结果如下：(1)本实验通过全基因合成法获得了经密码子优化的Bcillushalodurans S7内切木聚糖酶基因，通过串联表达盒方法构建得到一个四拷贝的菌株，在此基础上过量表达了与分泌途径相关的一个蛋白，最终构建得到高效分泌表达木聚糖酶的工程菌。在2L发酵罐中，甲醇诱导120h，以桦木木聚糖为底物，发酵上清酶活最大可达到3361 U/mL，发酵上清总蛋白最大可大5.2g/L。(2)研究表明：重组木聚糖酶最适温度为70℃，最适pH值为9.0，并显示出较好的热稳定性和宽pH适应性，符合在纸浆漂白中的应用。(3)从蛋白质组学分析外源蛋白在毕赤酵母中高效表达的关键蛋白，通过iTRAQ蛋白质定量分析该重组菌，精确定量获得了毕赤酵母中胞内表达的1161个蛋白，得到了与蛋白质分泌途径相关的关键蛋白。
造纸工业 纸浆漂白工艺 碱性木聚糖酶 毕赤酵母 基因表达
林小琼 王蓓蓓 韩双艳 林影
广东省广州番禺大学城华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室 510006
国内会议
大连
中文
70-71
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）