Rhodococcus rhodochrous tg1-A6腈水解酶的定向改造

摘要：

　　本文采用定向进化的方法对该腈水解酶进行改造以提高腈水解酶的活力。从重组质粒pET-Nit出发,利用不同浓度的锰离子对腈水解酶基因进行易错PCR并构建随机突变库。根据腈水解酶催化羟基乙腈可导致反应体系pH值降低的特性,建立了简便的突变酶筛选方法。经过两轮的随机突变和筛选,从5000多个克隆中筛选得到了一株活性提高的突变菌BL21 (DE3)/pET-NitMut2,其催化羟基乙腈的活力达到原始重组菌的4倍.NitMut2经DNA测序,发现腈水解酶基因发生了Asp27Glu、Asn97Lys和Leu246Phe等3个位点的突变。

关键词： 腈水解酶 定向进化 突变酶 菌株筛选

作者: 马金伟 罗晖 常雁红 卫海珍 周北海

作者单位: 北京科技大学环境工程系,北京100083;北京科技大学生物科学与技术系,北京100083 北京科技大学生物科学与技术系,北京100083 北京科技大学环境工程系,北京100083

会议类型: 国内会议

会议名称: 第五届全国化学工程与生物化工年会

会议地点: 西安

会议语种:中文

页码: 1112-1112

在线出版日期: 2008-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）