基质金属蛋白酶抑制因子-1靶向性小干扰RNA载体的构建及沉默效应研究

摘要：

　　目的：构建TIMP-1小干扰RNA真核表达载体并观察其对肝星形细胞株TIMP-1 mRNA表达的作用.方法：根据siRNA设计原则,在TIMP-1 mRNA序列中选择2个特异性靶序列(447-465nt、552-540nt)及1条无关对照序列；体外合成对应发卡样DNA片段,将其克隆人pGEM-T连接载体,BamHⅠ和XhoⅠ分别双酶切pGEM-T及表达载体pRNAT-U6.2,胶回收粘末端将特异序列定向亚克隆构建TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,用脂质体包裹转染入T6细胞,采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA表达水平的变化.结果：所构建的TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,经酶切鉴定与测序,结果显示特定位点靶序列与设计序列完全一致；转染T6细胞后, IMP-1 mRNA表达明显降低.结论：成功构建TIMP-1 siRNA载体TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA,转染T6细胞可以有效抑制TIMP-1 mRNA的表达.

关键词： 肝纤维化 基因治疗 基质金属蛋白酶抑制因子1 RNA干扰 沉默效应

作者: TIAN Li 田力 LI Ji-chang 李继昌 ZHAO Guo-qiang 赵国强 CHEN Kui-sheng 陈奎生

作者单位: Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450 郑州大学公共卫生学院 河南 郑州 450002

会议类型: 国内会议

会议名称: 2006年郑州大学博士生学术论坛

会议地点: 郑州

会议语种:中文

页码: 185-191

在线出版日期: 2006-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）