快速检测单核细胞增多性李斯特菌LAMP方法的建立
单核细胞增多性李斯特菌(李氏菌,LM)能引起一系列食物源性疾病并伴发高致死率.如果李氏菌污染食品,可以存活并繁殖一段时间,增加了食品污染的风险.在本实验中,一种核酸扩增方法：环介导等温扩增方法(LAMP)用于检测李氏菌.本实验LAMP检测方法以hly基因作为靶标基因进行扩增.LAMP原理是针对目的基因的六个区域,设计两对四条引物(两条内引物：BIP和FIP,两条外引物：B3和F3).对LAMP反应体系内的某些组分及反应因素：反应温度,反应时间,内、外引物的比例,甜菜碱(betaine),三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)进行优化,来增强LAMP反应的灵敏性和特异性.对本实验中建立的LAMP检测方法进行灵敏性和特异性的检测,并对32管人工加标的污染肉品进行检测。优化后各组分的浓度为：25μL体系中1μL大分子聚合酶(Bst DNA polymerase)(8 U/μL),0.2 μM外引物,1.0 μM内引物,1.8 mM dNTPs,1 M betaine,及2μL基因组.反应在60℃进行60 min.基因组及菌落的最低检测限分别为77.5 fg/uL和77 CFU/mL.
食品安全 单核细胞增多性李斯特菌 环介导等温扩增法 灵敏度分析
徐云明 Yun-Ming Xu De-Ying Zou 邹德颖 Feng Tang 唐峰 Xing Guo 郭兴 Zhao-Hui Li 李兆辉 Guang-Ming Wang 王光明 Shi-Ying Lu 卢士英 Yu Zhou 周玉 柳增善 Zeng-Shan Liu Hong-Lin Ren 任洪林
人兽共患病研究教育部重点实验室吉林大学人兽共患病研究所 畜牧兽医学院 吉林长春130062 Key Laboratory of Zoonosis Research,Ministry of Education,Institute of Zoonosis,College of Animal Sc Key Laboratory of Zoonosis Research,Ministry of Education,Institute of Zoonosis,College of Animal Sc 人兽共患病研究教育部重点实验室吉林大学人兽共患病研究所 畜牧兽医学院 吉林长春130062;畜牧兽医学院 辽宁医学院 辽宁锦州121001
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2012-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）