稳定表达鸡白细胞介素-18CHO-K1细胞系的建立

摘要：

　　为构建和稳定表达鸡白介素18(chicken interleukin-18,ChIL-18)的CHO-K1细胞系,采用RT-PCR方法从鸡的外周血淋巴细胞中扩增到IL-18基因,将编码成熟ChIL-18的基因克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建原核重组质粒并转化至大肠杆菌中诱导表达,用表达的重组蛋白制备兔抗ChIL-18血清.同时将全长基因定向克隆于真核表达载体pEGFP-N1中,经双酶切及测序鉴定,获得重组质粒pEGFP-ChIL-18.用该质粒转染CHO-K1细胞,经G418加压筛选,对转染的阳性细胞进行纯化,获得稳定表达ChIL-18蛋白的CHO-K1细胞系.以间接免疫荧光及western blot鉴定ChIL-18的表达状况,结果表明,重组ChIL-18蛋白在CHO-K1细胞中能够有效表达.该细胞系的建立为体外研究ChIL-18生物学功能提供了平台.

关键词： 鸡白介素18 CHO-K1细胞系 免疫机理 基因克隆

作者: LI Hang 李行 YANG Liu 杨柳 WU Yong-shu 武永淑 LI Hai-chao 李海超 GAO Cai-xia 高彩霞 ZHANG Wei 张伟 HAN Ling-xia 韩凌霞

作者单位: Laboratory Animal Center of Harbin Veterinary Research Institute, State Key Laboratory of Veterinary 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江哈尔滨150001 Laboratory Animal Center of Harbin Veterinary Research Institute, State Key Laboratory of Veterinary 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江哈尔滨150001;东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨 150030 Laboratory Animal Center of Harbin Veterinary Research Institute, State Key Laboratory of Veterinary 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物中心,黑龙江哈尔滨150001;甘肃农业大学动物科学技术学院,兰州甘肃730070

会议类型: 国内会议

会议名称: 第十届中国北方实验动物科技年会

会议地点: 长春

会议语种:中文

页码: 118-123

在线出版日期: 2012-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）