金黄色葡萄球菌外排蛋白QacA的优化表达研究
目的：提高金葡菌外排基因qacA在大肠埃希菌中的表达水平,为深入研究其结构功能、设计有效外排抑制剂奠定基础。方法：以重组质粒pBluescript Ⅱ SK(+)/qacA为模板,通过PCR方法 扩增出带有AatⅡ和NheⅠ酶切位点的qacA基因,经相应酶切、纯化后将目的 基因分别与同样进行酶切的质粒pET-coc01在T4连接酶的作用下连接；同时根据大肠埃希菌偏爱密码子,由公司对qacA基因进行密码子优化,将合成的基因插入到pET-cocol载体中。重组表达质粒pET-cocol/qacA及密码子优化的pET-cocol/qacA转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达情况,Western Blotting试验鉴定表达蛋白。结果：①酶切鉴定证实qacA基因及密码子优化的qacA基因已插入原核表达载体pET-cocol,重组表达质粒pET-cocol/qacA及密码子优化的pET-cocol/qacA已构建成功；②重组质粒pET-cocol/qacA转化大肠埃希菌BL21(DE3)后经IPTG诱导成功地表达了QacA蛋白,其分子量约为55 ku；优化后重组载体pET-cocol/qacA在大肠埃希菌中得到高效表达；③Westem Blotting试验显示QacA表达蛋白与合成的兔抗呈特异性免疫反应。结论：优化后的pET-cocol/qacA在大肠埃希菌中得到高效表达,为进一步研究qacA生物学功能奠定了物质基础。
金黄色葡萄球菌 外排蛋白 优化表达 大肠埃希菌
夏晓影 贾蓓
重庆医科大学附属第一医院感染科;重庆市传染病寄生虫病学重点实验室,重庆400016
国内会议
贵阳
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204-209
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）