结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库的构建
目的 构建结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库,克隆和筛选结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因.方法 通过毒力测定,选择出临床强弱毒株各1株.利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),对强弱菌株基因组用RsaI酶切,连接adaptor后进行两轮消减杂交和两次PCR.将第2次PCR产物纯化后与pGEM-T载体连接,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5 α进行文库扩增和蓝白斑筛选.挑取阳性克隆进行质粒提取,酶切验证阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析.结果 以结核分枝杆菌强毒株DNA为检测子的正向杂交和以弱毒株DNA为检测子的反向杂交各自高表达或特异性表达的片段得到选择性扩增,连接adaptor效率大于50％,消减组与非消减组差异明显,成功构建了结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库A库和B库.挑出阳性克隆102个,片段大小集中在100～900 bp之间.结论 利用SSH技术成功构建了结核分枝杆菌强弱毒株差异基因文库,该消减文库的建立为进一步筛选、克隆这两种菌株之间差异的毒力基因奠定了基础.
结核分枝杆菌 抑制消减杂交 毒力基因 基因文库
徐建 陆宇
北京市结核病胸部肿瘤研究所首都医科大学附属北京胸科医院药物研究室
国内会议
贵阳
中文
341-341
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）