LRR多肽对小鼠腹腔巨噬细胞TLR9通路的抑制作用及机制研究
目的 Toll样受体介导的信号通路是脓毒症产生的主要途径,被认为是脓毒症防治的重要候选靶点.本研究拟寻找有效的TLRs通路抑制剂并探讨其作用机制,为用于防治脓毒症奠定一定基础.方法 人工合成人TLR9胞外段的LRR多肽,采用ELISA法、实时荧光定量PCR法分别在蛋白水平和mRNA水平检测其对CpG ODN刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放细胞因子的影响,采用ELISA法观察其对CpG ODN诱导小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活化的影响,进一步采用蛋白印迹法观察其对抑制性κB降解的影响,进而明确LRR多肽对TLR9通路的抑制作用；采用细胞内化实验观察LRR多肽是否影响CpG ODN内化,进一步采用IAsys生物传感器明确LRR多肽是否特异性结合CpG ODN,最后采用双偏振干涉法测定LRR多肽与CpG ODN的解离平衡常数(KD),以比较不同多肽与CpG ODN的亲和力.结果 较LRR2,5,8,LRR11可特异性地显著抑制CpG诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB活化及细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ的释放,上述作用均呈一定的剂量依赖性；LRR11显著抑制CpG ODN的细胞内化,该作用同样呈一定的剂量依赖性；LRR11与CpG ODN亲和力最高,其与CpG ODN的KD值为4.79 nM,为高特异性结合.结论 LRR11对TLR9通路的关键效应分子NF-κB的活化及炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ的分泌均有良好的抑制作用,其机制是通过特异性结合CpG ODN而抑制其细胞内化,从而抑制TLR9通路活化.
脓毒症 TLR9 CpG ODN LRR11 细胞因子 核因子κB 细胞内化 亲和力
潘夕春 周红
第三军医大学药学院药理学教研室,重庆400038
国内会议
贵阳
中文
354-354
2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）