去分化表皮细胞重获再生表皮替代物的研究
目的：探讨β-连环蛋白活化对于分化表皮细胞特性的影响以及形成表皮替代物的能力.方法：利用差速贴壁法从表皮片中分离出人体表皮细胞接种于6孔板并分为3组,即对照组(无处理组),LiC1处理组和GSK-3β抑制剂处理组.应用LiC1和高度特异性GSK-3β抑制剂活化β-连环蛋白表达,针对β-连环蛋白活化对于去分化细胞的形态、表型和生长特性的影响观察,并对比细胞体外再生表皮的能力.结果：3组细胞中,免疫印迹和光动力学分析显示β-连环蛋白在LiC1组和GSK-3β抑制剂组表皮细胞核内的表达较未处理组显著增高.培养3、6d时,倒置相差显微镜下见两处理组细胞表现为表皮干细胞的典型变化.免疫组化分析表明两处理组CK10表达的数量和比例均显著下降,而表皮干细胞的标记物CK19和β1整合素的表达加强.与对照组相比,Oct4和Nanog基因在去分化的处理组细胞中高4-6倍.3d时两处理组已明显的集落形成,而对照组生长稀疏.流式细胞仪检测出的细胞周期数据表明两处理组中有较多细胞处于增殖期,且与对照组有显著差异.持续传代培养表明两处理组有更强的远期增殖潜能.培养11d后,对照组未成表皮单层,但处理组和表皮干细胞组在真皮替代物表面再生了复层表皮.结论：表皮细胞在分化后能够因β-连环蛋白的表达增加而重新恢复表皮干细胞的特征.LiC1和GSK-3β抑制剂处理可引起分化后表皮细胞胞核中的β-连环蛋白表达增加.去分化细胞表皮能表现出干细胞的形态、表型和生长特性.此外,去分化的细胞所再生的表皮与表皮干细胞所产生的类似.实验结果表明,通过调控β-连环蛋白的表达实现高效的去分化过程可产生丰富的表皮干细胞.
去分化 分化后表皮细胞 表皮干细胞 β-连环蛋白 整合素 细胞角蛋白 皮肤替代物 创伤修复
赵志力 谷廷敏 李蠡 隋志甫 石成方 张翠萍 雷永红 杨蓉娅
北京军区总医院皮肤激光整形美容中心 解放军总医院第一附属医院
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2012-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）