Wnt/β连环蛋白信号在人真皮成纤维细胞表型转化中的作用及机制
目的 了解wnt/β连环蛋白信号在人正常真皮Fb向肌成纤维细胞(MFb)表型转化中的作用及机制.方法 采用酶消化法分离培养人正常皮肤组织真皮Fb.(1)实验1.按随机数字法将细胞分为4组：对照组,采用无血清DMEM培养液(以下简称培养液)培养；TGF-β1组,用含10 ng/mL重组人TGF-β1(浓度下同)的培养液培养；Wnt3a组,用含150 ng/mL重组人Wnt3a(浓度下同)的培养液培养；TGF-β1+ Wnt3a组,用含重组人TGF-β1和重组人Wnt3a的培养液培养.48 h后,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法,检测β连环蛋白和α-SMA的mRNA及蛋白表达水平.(2)实验2.按照随机数字法将细胞分为4组：对照组、TGF-β1组,处理方法同实验1；SB415286(糖原合酶激酶-3β阻断剂)组,用含10 μmol/L SB415286(浓度下同)的培养液培养；TGF-β1+ SB415286组,用含重组人TGF-β1和SB415286的培养液培养.48 h后,分别采用实时定量荧光PCR和蛋白质印迹法检测α-SMA的mRNA和蛋白表达水平；用免疫荧光细胞化学法检测Fb中α-SMA阳性表达情况.各项检测重复3次,对数据进行方差分析及LSD-t检验.结果 (1)实验1.①β连环蛋白的mRNA表达水平：对照组、TGF-β1组、Wnt3a组和TGF-β1+ Wnt3a组Fb组间比较,差异无统计学意义(F=0.302,P=0.823).②β连环蛋白的蛋白表达水平：4组比较,差异有统计学意义(F=16.713,P=0.001).与对照组0.34±0.11相比,TGF-β1组、Wnt3a组均显著上调(0.73±0.12、0.82±0.17；t值分别为3.028、3.727,P＜ 0.05或P＜ 0.01).TGF-β1+Wnt3a组表达水平(1.23±0.21)显著高于其余3组(t值分别为6.911、3.883、3.184,P值均小于0.01).③α-SMAmRNA表达水平：4组间比较,差异有统计学意义(F=31.830,P=0.0008)；与对照组相比,TGF-β1组显著提高、Wnt3a组则下调,Wnt3a+TGF-β1组低于TGF-β1组(t值分别为6.759、2.535、4.532,P＜0.05或P＜0.01).④α-SMA蛋白表达水平：对照组、TGF-β1组、Wnt3a组、TGF-β1+Wnt3a组分别为0.83±0.17、1.43±0.20、0.53±0.12、0.89±0.14 (F=16.597,P=0.001).与对照组相比,TGF-β1组表达水平显著提高、Wnt3a组则下调、TGF-β1+Wnt3a组α-SMA表达水平低于TGF-β1组(t值分别为4.582、2.291、4.123,P＜0.05或P＜0.01).(2)实验2.①α-SMA mRNA表达水平：4组间比较,差异有统计学意义(F=34.101,P=0.0006).SB415286组明显低于对照组、TGF-β1+SB415286组明显低于TGF-β1组(t值分别为2.511、3.587,P＜0.05或P＜0.01).②4组细胞α-SMA蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(F=11.381,P=0.003).SB415286组显著低于对照组(t=2.364,P＜ 0.05),TGF-β1+ SB415286组低于TGF-β1组(t=2.556,P＜0.05).③免疫荧光细胞化学检测显示,对照组Fb中表达红色丝状α-SMA的Fb极少；TGF-β1组α-SMA表达较对照组显著增强(t=11.198,P＜ 0.01)；SB415286组α-SMA表达较对照组减少,TGF-β1+ SB415286组α-SMA表达较TGF-β1组显著减少(t=5.902,P＜0.01).结论 Wnt/β连环蛋白信号可能参与Fb细胞表型转化,并且对TGF-β1所介导的促转化作用起负性调控作用.
成纤维细胞 转化生长因子β1 Wnt蛋白质类 表型转化 β连环蛋白 肌成纤维细胞
刘佳琦 潘庆 王耘川 刘洋 王耀军 白丽 白晓智 胡大海
第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科·全军烧伤中心 西安710032
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447-448
2012-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）