大鼠CTGFmiRNA质粒载体构建及其稳定转染肝星状细胞系的建立
目的：构建结缔组织生长因子(CTGF)基因miRNA质粒载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR,获得CTGF miRNA质粒稳定转染大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的细胞系.方法：根据大鼠CTGF基因mRNA序列设计并合成3对寡聚单链DNA及1对阴性对照序列DNA,将3对寡聚单链DNA及1对阴性对照序列DNA退火成双链分别插入到质粒载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR,构建成CTGF基因miRNA表达的3个质粒及一个阴性质粒.4种质粒分别转染肝星状细胞,经RT-PCR检测4种质粒对CTGF基因的干扰效率并筛选出干扰效率最高的质粒.将干扰效率最高的质粒及阴性质粒分别转染肝星状细胞,经杀稻瘟菌素持续压力筛选稳定转染的细胞克隆.结果：成功构建了CTGF基因miRNA表达质粒载体,筛选出于扰效率最高的质粒载体并稳定转染了肝星状细胞.结论：获得了稳定表达CTGF miRNA质粒的大鼠肝星状细胞株,为进一步研究CTGF在肝纤维化中所起的具体作用及其治疗策略奠定了坚实的前期基础.
李孝生 阳宏 向颖 邢旎旎 沈艳
重庆医科大学附属第二医院消化内科,400010
国内会议
天津
中文
200-201
2012-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）