S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosyl-L-methionine,SAM)广泛存在于动物、植物和微生物体内,它是一种重要的中间代谢产物。SAM可用于治疗肝病、抑郁症及关节炎等疾病，也是抗衰老的高级保健药物。本文从酿酒酵母的基因组中克隆到S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因片段，将该片段与T-载体pGEM-T连接后转化大肠杆菌XLBIue的感受态细胞，对筛选到的阳性克隆进行DNA序列测定。测序结果表明，该SAMS基因片段长度为1155bp，编码384个氨基酸残基，与GenBank数据库中报道的酿酒酵母的SAM合成酶氨基酸序列的相似性为99％。将以上获得的SAMS基因片段亚克隆到大肠杆菌表达载体pET28a上，构建了SAMS重组表达质粒pET 28a-SAMS。并将该质粒成功转入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中，构建了重组SAMS的大肠杆菌表达菌株BL21(pET 28a-SAMS)。分别采用IPTG和乳糖诱一导表达进行诱导后，经SDS-PAGE电泳鉴定结果表明，酿酒酵母的SAMS在大肠杆菌BL2l(DE3)中得到了可溶性表达，获得了分子量与预期相符的重组SAMS(46KDa左右)。通过固定金属离子亲和层析技术纯化出重组SAMS。采用高效液相色谱法测定其生物学活性，结果表明该重组SAMS具有生物学活性。该研究为采用合成生物学的方法在大肠杆菌中生产SAM奠定了基础。
药物开发 S-腺苷甲硫氨酸合成酶 基因克隆 大肠杆菌 表达载体
杜翠红 魏晓楠
集美大学生物工程学院 厦门 361021
国内会议
成都
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110-110
2012-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）