含有肝星状细胞特异性启动子Desmin的慢病毒载体的构建及表达
目的：构建肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)特异性启动子结蛋白(Desmin)调节的慢病毒载体,观察其对大小鼠肝星状细胞的特异性感染并评估其感染效率。方法：用RT-PCR的方法克隆Desmin的启动子序列,将Desmin基因启动子取代慢病毒载体上游的磷酸甘油酸激酶(phosphoglyceric kinase,PGK)启动子,并将构建的质粒进行酶切和基因测序鉴定。将构建的含有Desmin启动子的质粒与慢病毒载体的包装体系pRsv-REV、pMD1g-pRRE、pMD2G共转染293T细胞进行慢病毒载体包装,48h后收集含有病毒颗粒的细胞上清液,离心后并进行滴度测定。将重组的慢病毒载体pLenti-pDesmin-GFP感染Desmin阳性的大鼠肝星状细胞株T6及小鼠肝星状细胞株JS1,及Desmin阴性的人肝星状细胞株LX-2进行鉴定,以慢病毒载体pLenti-pPGK-GFP作为对照,倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。
张晶 平键 徐列明
上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学肝病研究所 上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学肝病研究所;肝肾疾病病证教育部重点实验室;上海市中医临床重点实验室 201203
国内会议
昆明
中文
170-171
2012-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）