临床规模型NK细胞的体外培养及鉴定
目的 建立适用于临床，针对恶性肿瘤进行免疫细胞治疗的NK细胞体外培养扩增方法，并对所得效应细胞进行表型鉴定。方法 利用血细胞分离机采集病人外周血单个核细胞，密度梯度离心法分离纯化后，在细胞因子IL-2和IFN-γ的参与下，与基因修饰后膜表达IL-15/IL-18/4-1BBL并经照射后全部死亡的滋养层细胞K562进行共培养，于第6、10、14天分别半量换液，以流式细胞术鉴定最终收获细胞表型，并留取细胞悬液，进行血平板的接种、血培养及支原体培养检测。结果 第0、6、10、14天的细胞悬液，经流式测定CD3-/CD56+(即NK细胞)的比例平均分别为11％、31％、49％、72％，其中以第14天的NK所占比例最高，且显著高于刚分离的单个核细胞中NK细胞所占的比例。镜下观察细胞状态良好，经台盼蓝染色测定细胞活度＞98％，无细菌、支原体等污染发生。结论 本培养方法能够在体外安全、有效地增殖NK细胞群，满足临床需求。
刘滋康 李玉芝 汪毅 张艳斌 郭坤元 鲍扬漪
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2012-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）