结核分枝杆菌Rv3623基因的抗原性及其多克隆抗体的制备
目的 前期相关研究表明结核分枝杆菌(M.tb) Rv3623基因具有较好的特异性,本研究将构建其原核表达载体并获得其重组蛋白,并研究其抗原性,探讨其作为新型结核病特异性标志物的可行性.方法 用PCR方法扩增M.tb Rv3623基因,克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):Rv3623重组质粒,阳性克隆测序验证正确后转化入表达宿主大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导RV3623蛋白表达,经Ni+-NTA层析柱纯化获得重组蛋白.应用免疫印迹方法(Westem Blot)同时检测结核病病人和PPD阴性正常人血清中该抗原基因对应的抗体.将纯化的RV3623重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗RV3623抗血清,抗血清的效价测定采用酶联免疫吸附试验法(ELISA),将该兔抗血清进一步纯化获得其多克隆抗体,采用Western blot方法鉴定该多克隆抗体与重组蛋白RV3623的免疫反应性,并检测该多克隆抗体的特异性.结果 经酶切鉴定和测序分析证实Rv3623原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示在48 kD处呈现单一蛋白条带.用重组蛋白RV3623免疫接种新西兰大白兔后可诱导出高滴度的特异性抗体.纯化的重组蛋白RV3623被证实有较强的免疫原性；并制备了其多克隆抗体.结论 成功构建原核表达重组质粒pET30a(+):rv3623,证实RV3623重组蛋白具有较好的免疫原性并制备了其多克隆抗体,为进一步研究其作为结核病的潜在分子标志物的可行性奠定了基础.
结核分枝杆菌 Rv3623 抗原 多克隆抗体
曹廷明 古淑香 马玙 张宗德 贾红彦 邢爱英 杜凤娇 刘洋 刘忠泉 李自慧 郑晓静 杜博平
首都医科大学附属北京胸科医院/北京市结核病胸部肿瘤研究所
国内会议
杭州
中文
225-225
2012-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）