HBHA蛋白缺失端表达纯化及其在结核病临床诊断中应用研究
目的：原核表达纯化HBHA△C和HBHA△N蛋白,比较nHBHA,rHBHA,HBHA△C和HBHA△N的肝素结合及聚集BCG凝集活性.为进一步研究HBHA的临床诊断提供实验依据.方法：用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出HBHA△C和HBHA△N基因片段.将目的基因克隆至PQE80L克隆表达载体中,序列测定正确后,将其转化到大肠杆菌(E.coli)BL-21中,再经IPTG诱导蛋白表达,表达蛋白经SDS-PAGE及Western blot分析后,亲和层析法纯化蛋白.观察抗体对不同浓度nHBHA和rHBHA诱导BCG聚集效应的影响.将nHBHA,rHBHA,HBHA△C以及HBHA△N蛋白通过Heparin Sepharose CL-6B以检测各蛋白的肝素结合能力.将蛋白加入到培养BCG的7H9液体培养基中,观察其诱导BCG聚集情况.结果：nHBHA,rHBHA及HBHA△N蛋白均具有肝素结合能力.nHBHA,rHBHA和HBHA△C蛋白具备诱导BCG聚集的作用.结论：成功获得HBHA△C和HBHA△N蛋白蛋白；并证实了nHBHA,rHBHA,HBHA△C均具有促进BCG聚集的功能,但诱导聚集能力存在明显区别.nHBHA,rHBHA,HBHA△N具有与肝素结合的能力.该试验结果为进一步研究结核病感染分子机制以及分子诊断提供依据.
结核分枝杆菌 蛋白缺失端 诱导表达 临床诊断
周珊 徐修礼 马越云 刘家云 程晓东 张倩 郝晓柯
第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心
国内会议
长沙
中文
101-107
2012-09-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）