转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测

摘要：

　　目的：为了建立通过动物被毛获取蜘蛛拖丝蛋白的方法，本研究利用pIRES2-EGF和PMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)，构建逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP.方法：采用磷酸钙法将PMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒.通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力，并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况.结果：其结果，成功构建了逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP；通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×105cfu·mL-1； PCR鉴定结果显示，目的基因2S-IRES-EGFP已整合入NIH-3T3细胞基因组中.结论：上述结果为进一步开展通过逆转录病毒转基因法获得表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因动物奠定基础.

关键词： 动物病毒学 蜘蛛拖丝蛋白 逆转录病毒 转基因动物

作者: NING Fang-Yong 宁方勇 LIANG Yang 梁洋 WANG Chun-sheng 王春生 PIAO Shan-Hua 朴善花 AN Tie-zhu 安铁洙

作者单位: 东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会

会议地点: 山西太谷

会议语种:中文

页码: 194-201

在线出版日期: 2012-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）