刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因的克隆、表达与免疫原性分析

摘要：

　　目的：对刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM 2)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法：收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA；设计合成引物并引入KpnⅠ和BamHⅠ酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPGAM 2的基因片段并克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切PCR及测序鉴定阳性克隆；在大肠杆菌BL21/DE3用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定,通过Western blott( WB)分析重组蛋白的免疫原性。结果：从弓形虫RH株cDNA中扩增出756 bp的TgPGAM 2基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPGAM 2；SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效可溶性表达。重组蛋白的相对分子量约30ku,WB显示其能被兔抗弓形虫血清识别。结论：RH株刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2可在原核表达系统中高效可溶性表达,该重组蛋白具有免疫原性,可望作为弓形虫疫苗的候选抗原。

关键词： 刚地弓形虫病 疫苗免疫 磷酸甘油酸变位酶 基因克隆 原核表达 免疫原性

作者: WANG Fen 王芬 LIU Hong-li 王海龙 YIN Guo-rong 殷国荣 MENG Xiao-li 孟晓丽 LIU Yang 刘阳 WANG Hai-long 刘红丽

作者单位: Institute of Medical Parasitology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China 山西医科大学医学寄生虫学研究所、寄生虫学教研室,太原030001

会议类型: 国内会议

会议名称: 第三届北京热带医学与寄生虫学论坛

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 162-169

在线出版日期: 2011-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）