CSFV E2逆转录病毒表达载体的构建及其稳定表达哺乳动物细胞系的建立

摘要：

　　目的：构建猪瘟病毒(CSFV) E2基因的逆转录病毒表达载体,建立稳定表达CSFV E2蛋白的哺乳动物细胞系,为深入开展CSFV E2基因的研究奠定基础。方法：从质粒pCDSW、pCDST中扩增CSFV E2 (SW、ST)基因,构建重组逆转录病毒表达载体pLXRN-SW-HIS、pLXRN-ST-HIS,将重组质粒转染哺乳动物细胞PK-15,通过PCR、ELISA、IFA和Western-blot的方法检测E2蛋白的表达,G418抗生素500μg/mL培养基加压筛选后建立稳定表达CSFV E2蛋白的细胞系。结果：重组PK-15细胞连续传代30代,E2蛋白在胞浆中稳定表达,且表达量达到80％以上。结论：成功构建CSFV E2重组逆转录病毒表达载体,并建立了稳定、高效表达CSFV E2蛋白的哺乳动物细胞系,为进一步研究CSFV E2基因与宿主细胞PK-15的相互作用奠定基础。

关键词： 猪瘟病毒 囊膜糖蛋白 逆转录病毒载体 基因表达 细胞系

作者: Qu-hui 曲会 Li-Su 李素 Guo-huancheng 郭焕成 Zhao-fuguang 赵福广 Tu-changchun 涂长春

作者单位: Institute of Veterinary Sciences, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130062;Jilin Agric 军事医学科学院军事兽医研究所 长春 130062;吉林农业大学 长春 130118 Institute of Veterinary Sciences, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130062 军事医学科学院军事兽医研究所 长春 130062 Jilin Agricultural University, Changchun 130118 吉林农业大学 长春 130118

会议类型: 国内会议

会议名称: 第四届中国畜牧科技论坛

会议地点: 重庆

会议语种:中文

页码: 116-121

在线出版日期: 2009-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）