体外转染hIGF-1基因重组腺病毒载体对家兔椎间盘髓核细胞凋亡的影响
目的：本实验利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导培养的家兔椎间盘髓核细胞凋亡，携带MGF-1基因腺病毒载体转染进行干预，探讨胰岛素样生长因子I(IGF-1)对髓核细胞凋亡的抑制作用。<br> 方法：1.从健康家兔取出椎间盘髓核，用Ⅱ型胶原酶消化法分离原代椎间盘髓核细胞后，单层培养并以胰酶消化法传代，采用差速贴壁法进行纯化。2.构建携带hIGF-1基因腺病毒载体，由深圳市百恩威生物科技有限公司代为构建。3.按空白组、Ad-IGF-1组(携带hIGF-1基因腺病毒载体和TNF-α共同作用)、TNF吨组(仅TNF-α因子作用)进行分组处理。4.利用荧光显微镜观察病毒载体转染情况，Western-blot检测hIGF-1蛋白，rn-PCR技术检测hIGF-1 mRNA；利用光学显微镜、原位末端标记(TUNEL)进行观察，利用流式细胞仪(Annexin-v/PI双染)、测定细胞早期以及晚期凋亡率作为凋亡检测指标。<br> 结果：1.荧光显微镜下观察，细胞转染成功，大部分细胞带有绿色荧光；Western-blot检测Ad-hlGF-1组有.hIGF—1蛋白表达，而空白组及TNF-α组无表达；rt-PCR检测Ad-hIGF-1组有hIGF-1 mRNA表达，而空白组及TNF—α无hIGF-1mRNA表达。2.流式细胞仪检测显示：与空白组比较,TNF-α组凋亡率明显增加，差异有显著性(P<0.01)；与Ad-hIGF-1组比较，TNF-α组凋亡率明显增加，差异有显著性(P<0.05)。3.原位末端标记检测显示：与空白组比较,TNF-α组凋亡率明显增加，差异有显著性(P<0.01)：与Ad-MGF-1组比较-αTNF-α组凋亡率明显增加，差异有显著性(P<0.01)。<br> 结论：本实验成功进行了携带hIGF-1基因腺病毒载体对髓核细胞的体外转染，MGF-1基因对TNF-α诱导的体外髓核细胞凋亡有抑制作用。
椎间盘退变 髓核细胞 胰岛素样生长因子-Ⅰ 组腺病毒载体 体外转染 凋亡机制
张长春 周建生 崔国鹏
蚌埠医学院第一附属医院骨科
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2012-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）