酪氨酸蛋白激酶配体ephrinB2蛋白靶向miRNA表达载体构建及其沉默效率评价

摘要：

　　目的：针对大鼠的Efnb2基因序列(目的蛋白EphrinB2),构建特异性干扰微小RNA(miRNA)及其表达载体pcDNA”6.2-GW/EmGFPmiR,并检测其对Efnb2基因的干扰作用。<br>　　方法：根据NM001107328基因序列设计并合成4对miRNA oligo；将4对oligo退火成双链.然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将4对双链miRNA oligo分别插入到miRNA表达载体pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个miRNA表达质粒,通过脂质体2000将已经构建好的pcDNATM 6.2-GW/EmGFPmiR干扰质粒转染至大鼠嗜铬细胞瘤PCI2细胞中,通过qPCR检测Efnb2基因表达水平的变化.<br>　　结果：DNA测序分析证明Efnb2基因的miRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明Efnb2基因的表达水平明显降低.<br>　　结论：成功地构建了针对Efnb2基因的miRNA载体,转染细胞后对Efnb2基因沉默.

关键词： 微小RNA RNA干扰 基因治疗 酪氨酸蛋白激酶配体 ephrinB2蛋白 嗜铬细胞瘤 细胞株PC12

作者: 潘佳忻 张锋 吴新民 张志文

作者单位: 北京大学医学部北京大学第一医院麻醉科,北京,100034

会议类型: 国内会议

会议名称: 第三届北京大学重症医学论坛

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 217-221

在线出版日期: 2011-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）