猪链球菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其免疫保护性

摘要：

　　目的：原核表达、纯化猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH)，并检测其免疫原性和免疫保护性。方法：应用PCR方法扩增gdh的完整ORF，按正确的阅读框架将其克隆入原核表达载体pET-30a，构建pET-30a-gdh表达质粒，转化E.coli BL21(DE3)，筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达，表达的rGDH经亲和层析纯化后免疫家兔，ELISA法检测家兔血清中抗rGDH抗体效价，Western blot检测rGDH免疫原性，并用活菌攻毒，计算家兔的保护率。结果：构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达，Ni+NTA柱纯化获得较高纯度的重组蛋白；纯化的rGDH免疫家兔后获得高效价的抗GDH抗体，被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带，5份实验感染猪血清均能与rGDH产生反应条带，且免疫家兔可获得50％的保护率。结论：成功原核表达并纯化了猪链球菌谷氨酸脱氢酶，重组蛋白免疫原性良好，并能够为家兔提供一定的免疫保护。

关键词： 猪链球菌 谷氨酸脱氢酶 原核表达 免疫保护 动物实验

作者: 夏小静 沈志强 王金良 李书光 陈金龙 白耀国 姜世金

作者单位: 山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州，256600 山东农业大学动物科技学院，山东泰安，271018 山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州，256600 山东绿都生物科技有限公司，山东滨州 256600 山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州，256600 山东绿都生物科技有限公司，山东滨州 256600 山东农业大学动物科技学院，山东泰安，271018

会议类型: 国内会议

会议名称: 2012第四届中国兽药大会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 258-263

在线出版日期: 2012-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）