基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法的建立及其初步应用

摘要：

　　目的：原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立问接ELIsA检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELIsA方法进行比较。方法：根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP—Flury株M基因序列设计特异性引物并引入Sma Ⅰ和Not Ⅰ酶切位点，经RT—PCR扩增得到目的基因，连接pCR(R)2.1载体，构建重组质粒pCR—Ry-M，重组质粒用Sma Ⅰ和Not Ⅰ进行双酶切，酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P—1中，构建重组表达载体pGEX—RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，使用IPTG诱导表达目的蛋白，SDS—PAGE分析表明蛋白表达量较大且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白，Western blot表明融合蛋白具有良好的反应原性，使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清，同时使用带有Hi s标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV—His—P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果：与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比，使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率，能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。

关键词： 狂犬病病毒 基质蛋白 原核表达 检测技术

作者: 程朝飞 宫苗苗 王勇 田康乐 赵占中 李刚

作者单位: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室，北京 100093 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室，北京 100093 中国农业大学动物医学院，北京 100193

会议类型: 国内会议

会议名称: 2012第四届中国兽药大会

会议地点: 北京

会议语种:中文

页码: 449-454

在线出版日期: 2012-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）