猪瘟病毒NS5A多克隆抗体的制备及鉴定
本实验采用原核表达方式表达CSFV NS5A重组蛋白(rp-NSSA)，以纯化获取的rp—NS5A免疫小鼠制备多克隆抗体。采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog CholeraLapinized Virus HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增NS5A基因序列，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)，构建成原核表达载体pETNS5A后在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达。然后采用Ni+亲和层析方法纯化目的蛋白，将目的蛋白以弗氏佐剂乳化免疫昆明小鼠。SDS-PAGE分析重组蛋白NS5A主要以包含体形式表达，分子大小约60 kDa；ELISA分析表明免疫小鼠血清中含有高滴度抗rp—NSSA抗体；间接免疫荧光(Indi rect Immunofluorescence As say IFA)证实NS5A分布在CSFV感染细胞的细胞浆中。本研究为进一步研究NS5A蛋白生物学功能奠定基础。
猪瘟病毒 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
蒋大良 胡云霏 王淑琴 屈泰龙 赵墩 钱幸 田世成 喻凯 余兴龙
湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128
国内会议
北京
中文
619-622
2012-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）