会议专题

不同DNA抽提方法对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫的影响

  为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提方法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较;再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价。结果显示,不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其它方法,检测灵敏度由高到低依此为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂金抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法;TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBR Green法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法。试验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏。该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义。

家蚕 微孢子虫 病毒监测 荧光定量PCR

何永强 董强 吴姗 鲁兴萌 邱海洪 帅江冰 张晓峰 王素华 徐国群 李光才

浙江出入境检验检疫局技术中心,杭州 310016 浙江大学动物科学学院,杭州 310029

国内会议

2012第四届中国兽药大会

北京

中文

810-815

2012-09-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)