家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒
基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫方法的目的,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性PCR引物和TaqMan探针,构建重组质粒制备标准品,进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建、研制了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法和诊断试剂。该方法的检测线性范围为1×108-1×102拷贝mL-1的7个线性梯度,检测敏感度达1×102mL-1家蚕微孢子虫,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%~7.2%,批间变异系数为5.2%~7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。
家蚕 微孢子虫 荧光定量PCR 诊断试剂盒
何永强 李光才 董强 吴姗 鲁兴萌 张弘 邱海洪 帅江冰 王素华 张晓峰 徐国群
浙江出入境检验检疫局技术中心,杭州 310012 浙江大学动物科学学院,杭州 310029 浙江中医药大学第一附属医院,杭州 310006
国内会议
北京
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826-831
2012-09-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)