构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞
目的：构建具有降氨功能的特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞。方法：设计引物，克隆人谷氨酰胺合成酶(hGS)基因及人甲胎蛋白(AFP)转录调控元件(TREs)(含增强子和启动子片段)；构建真核表达载体pLNChGS；并将pLNChGS载体上CMV启动子序列删除，插入人AFP TREs，构建真核表达载体pLNAFhGS；进行菌落PCR、酶切及DNA测序鉴定；转染PA317细胞，获得重组逆转录病毒，并感染HepG2细胞，得到阳性细胞克隆分别为HepG2／pLNCX、HepG2／pLNChGS和HepG2／pLNAFhGS；MTT法检测细胞增殖，进行hGS mRNA RT-PCR半定量分析，以及细胞hGS酶活性检测。结果：四种细胞生长增殖变化不明显；与对照细胞相比，HepG2／pLNChGS、HepG2／pLNAFhGS细胞的hGS mRNA呈高水平表达(p<0．001)，而HepG2／pLNAFhGS细胞mRNA的表达高于HepG2／pLNChGS，差异有统计学意义(p<0．00 1)；与对照细胞相比，HepG2／pLNChGS、HepG2／pLNAFhGS细胞的hGS酶活性较高(p<0．05)，而HepG2／pLNAFhGS细胞的hGS酶活性高于HepG2／pLNChGS细胞，差异有统计学意义(p<0．05)。结论：成功构建了特异高表达hGS的肝细胞，为进一步降氨毒功能的研究打下基础。
肝疾病 人源肝细胞 谷氨酰胺合成酶基因 特异高表达 降氨功能
唐南洪 王晓茜 李秀金 陈燕凌
福建医科大学附属协和医院 省肝胆外科研究所 350001
国内会议
洛阳
中文
158-162
2007-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）