miR-466a在转基因小鼠中的过表达诱发了类似于人类尿崩症(diabetes insipidus)的表现型
目的：生物信息学分析和我们的前期研究显示，miR-466a/b/c/e-5p/和miR-466a/b/c/e-3p分别具几乎完全相同的成熟miRNA序列，可能可以在肾髓质中对渗透调控转录因子OREBP/NFAT5进行转录后表达调控。我们因此研究了miR-466a在转基因小鼠中的过表达对小鼠。肾组织OREBP/NFAT5的表达和小鼠尿液浓缩机制的影响。方法：通过PCR从鼠基因组中扩增miR-466a基因序列，将片段插入鸡β-actin promoter下游构建过表达质粒pBact-miR-466a，然后将转基因片段酶切出来用于显微注射受精卵制备FVB遗传背景的转基因小鼠。小鼠基因型鉴定通过剪尾巴提取基因组DNA进行PCR分析。通过Real-time RT-PCR或Western blotting分析miR-466a5p/3p、OREBP/NFAT5、AR、SMIT、AQPs、UTAs等在转基因小鼠肾皮质和髓质中的表达。利用代谢笼测定8周龄野生型(WT)和miR-466a转基因小鼠的水摄入量和尿液排放，测定尿液中钠离子、钾离子、氯离子、尿素、肌酸酐等溶质含量。尿浓缩能力是采用对雄性8周龄WT和miR-466aTg1小鼠腹腔注射0.4μg/kg去氨加压素(dDAVP)，收集注射药物前和注射dDAVP后的尿液以分析尿液渗透压变化。结果：我们已成功制备两个品系的miR-466a转基因小鼠。Real．time RT-PCR分析发现其中一个品系(miR-466aTg1)小鼠的肾脏皮质和髓质中miR-466a-5p/3p表达量较W小鼠有非常显著的提升，而肾皮质和髓质中OREBP/NFAT5显著下调了25-30％(p<0.01)。在miR-466aTgl肾髓质中，AQP2、AQP3和UTA2有显著的下调，而AR、AQP1、UTA1和UTA3/5却有不同程度的上调。同时，注射dDAVP前后的miR-466aTg1小鼠的尿液渗透压均较相应的wT对照小鼠低约500mOsmol/kg(p<0.01)，miR-466aTg1小鼠尿液中多种溶质含量也较WT小鼠尿液均有所下降。结论：miR-466a在转基因小鼠中的过表达显著抑制了渗透调控转录因子OREBP/NFAT5及其靶基因的表达，从而显著影响了小鼠的尿液浓缩机制。miR-466a/b/c/-5p/3p因而是一组肾渗透调控和尿液浓缩机制的重要调控基因。
尿崩症 发病机制 miR-466a基因组 渗透调控转录因子 基因表达 动物实验
刘颖 罗羽 王涛 丁凤 杨云青
厦门大学应激细胞生物学国家重点实验室和生命科学学院生物医学科学系，厦门，福建 361005 第三军医大学护理学院，重庆 400038
国内会议
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2011-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）