基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用
目的：利用多重荧光PCR技术，建立一种快速、准确、特异检测常见分枝杆菌的方法。方法：以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因，设计DPO引物和TaqMan探针，探针的5’端分别用FAM、ROX、HEX和JOE进行荧光标记，3’端标记Eclipse。通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增，评价多重荧光PCR方法的特异性和敏感性。同时检测一定数量临床样本，结果与常规方法进行比较。结果：该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和三种常见非结核分枝杆菌，检测敏感性均为1×101cfu／ml。同时对68例痰液标本进行检测，结果显示31例检测结果阳性，阳性率45．6％。明显高于涂片染色镜检，差异具有统计学意义(P<0．05)。其中28例为结核分枝杆菌，1例为鸟分枝杆菌，2例为胞内分枝杆菌，与细菌培养鉴定方法一致。1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16S rRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌，多重荧光PCR方法出现漏检。结论：本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速，能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌，可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。
结核病 分枝杆菌 荧光PCR技术 临床诊断
陈光 吴盛海 余道军 徐丽慧 范大鹏 王贤军
310016 浙江大学附属邵逸夫医院检验科 310006 杭州市第一人民医院检验科 杭州市红十字会医院实验室
国内会议
黄山
中文
147-159
2012-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）